银杏内酯B对癫痫模型大鼠脑保护作用及其机制研究

中文关键词: 癫痫  银杏内酯  海马  动物行为学  SD大鼠  雄性  实验研究

中文摘要:

      目的：探讨银杏内酯B（GB）对癫痫（EP）模型大鼠脑组织的保护作用及其机制。方法：将120只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、丙戊酸钠（VPA）组与GB低、中、高剂量组，每组20只。除空白对照组外，其余各组大鼠采用氯化锂-匹罗卡品诱导制备EP大鼠模型。注射匹罗卡品前30 min，空白对照组和模型组腹腔注射生理盐水，GB低、中、高剂量组分别腹腔注射2.5、5、10 mg/kg GB，VPA组腹腔注射300 mg/kg VPA。注射匹罗卡品后2 h内观察各组大鼠行为学变化，记录EP首次发作潜伏期、发作持续时间，参照Racine分级标准对各组大鼠EP发作程度进行分级。注射匹罗卡品24 h后，各组随机取10只大鼠，脑组织固定切片，苏木精-伊红（HE）染色，观察大脑海马组织病理学改变；末端脱氧核苷酰基转移酶介导dUTP切口末端标记（TUNEL）法观察各组大鼠海马区神经元凋亡状况。各组剩余的10只大鼠，于注射匹罗卡品24 h后，取脑剥离海马，研磨匀浆，离心取上清液，黄嘌呤氧化法和钼酸铵法分别检测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活力，硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）含量，蛋白质免疫印迹（Western blot）法检测核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、核因子-κB（NF-κB）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、激活型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达。结果：与模型组比较，GB中、高剂量组和VPA组大鼠EP发作潜伏期明显延长、发作持续时间明显缩短（P < 0.01） ，EP发作程度明显降低（P < 0.01）；海马神经元病变和凋亡状况明显改善，凋亡指数降低（P < 0.01）；SOD、CAT活力升高且MDA含量降低（P < 0.05或P < 0.01）；Nrf2、HO-1表达上调而NF-κB、Cleaved Caspase-3表达下调（P < 0.01） ，Cleaved Caspase-3/Caspase-3比值降低（P < 0.01）。上述指标除CAT活力外，GB对其他指标的改善作用均表现出剂量依赖性；除CAT活力和Caspase-3表达外，高剂量GB对其他指标的影响均显著优于VPA（P < 0.05或P < 0.01）。结论： GB对EP模型大鼠具有抗痫和脑组织保护作用，其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路进而抑制氧化应激和细胞凋亡有关。

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