片仔癀保护小鼠局灶性脑缺血再灌注后血脑屏障的分子机制研究

中文关键词: 缺血性脑卒中  片仔癀  血脑屏障  紧密连接蛋白  Akt/GSK3β/β-catenin通路

中文摘要:

      目的:探讨片仔癀对局灶性脑缺血再灌注小鼠血脑屏障(BBB)的保护作用及其分子机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、丁苯酞组(120 mg/kg)、片仔癀低剂量组(370 mg/kg)、片仔癀高剂量组(740 mg/kg)和片仔癀(740 mg/kg) +LY294002(20 mg/kg)组,除假手术组以外,其余各组小鼠采用线栓法建立大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型,假手术组不插入线栓。再灌注后2 h,各给药组分别灌胃给予相应药物(LY294002采用腹腔注射),假手术组与模型组同期灌胃等量生理盐水,各组均每日给药1次,连续3 d。末次给药后2 h,各组分别取8只小鼠进行神经功能缺陷评分,评分结束后,处死小鼠取脑,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察脑梗死情况并计算脑梗死率;各组分别取3只小鼠,处死取脑,苏木素-伊红(HE)染色,观察脑组织病理学改变;各组分别取6只小鼠,采用伊文思蓝(EB)法检测BBB通透性;各组分别取6只小鼠,分离缺血侧大脑皮层组织,其中3只小鼠提取总蛋白,采用Western blot法检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合酶激酶-3β(p-GSK3β)、胞质紧密粘连蛋白1(ZO-1)和闭合蛋白5(Claudin-5)的表达水平,另3只提取核蛋白用于检测β-连环蛋白(β-catenin)的核转位水平。结果:模型组小鼠的神经功能缺陷评分、脑梗死率均显著高于假手术组(P<0.01),丁苯酞组及片仔癀高剂量组小鼠上述指标均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01),片仔癀低剂量组小鼠脑梗死率显著低于模型组(P<0.01),片仔癀+LY294002组上述指标与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05),其中神经功能缺陷评分显著高于片仔癀高剂量组(P<0.05)。HE染色后脑组织病理变化提示,模型组小鼠缺血区脑组织水肿,神经元胞体变性;片仔癀高剂量组和丁苯酞组小鼠脑组织神经元变性坏死明显减轻;片仔癀+LY294002组小鼠脑组织病理改变较片仔癀高剂量组明显加重。模型组小鼠脑组织EB渗漏量显著高于假手术组(P<0.01),丁苯酞组、片仔癀高剂量组EB渗漏量显著低于模型组(P<0.05,P<0.01),片仔癀+LY294002组EB渗漏量显著高于片仔癀高剂量组(P<0.01),且与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组小鼠缺血侧大脑皮层p-Akt、p-GSK3β、ZO-1、Claudin-5蛋白表达水平及β-catenin核转位水平均较假手术组显著降低(P<0.01),丁苯酞组及片仔癀低、高剂量组小鼠上述指标均显著高于模型组(P<0.05,P<0.01),其中片仔癀高剂量组对上述指标的改善更为明显,片仔癀+LY294002组上述指标与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05),且均显著低于片仔癀高剂量组(P<0.05,P<0.01)。结论:片仔癀对MCAO/R小鼠的BBB完整性具有保护作用,其机制可能与激活Akt/GSK3β/β-catenin信号通路,上调ZO-1和Claudin-5的表达有关。

英文摘要: