基于Wnt/β-catenin信号通路探索芪蛭通络方对糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化的作用机制

中文关键词: 糖尿病肾病  芪蛭通络方  肾间质纤维化  Wnt1  β-连环蛋白

中文摘要:

      目的：基于Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路探讨芪蛭通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾间质纤维化的作用机制。方法： SD大鼠予高糖高脂饲料及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作DKD模型，取50只造模成功的大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组(每日14 mg/kg)和芪蛭通络方低、中、高剂量组(每日1.215 g/kg、2.430 g/kg、4.860 g/kg)，每组10只。同时取10只SD大鼠予普通饲料和腹腔注射柠檬酸缓冲液，作为正常组。造模成功后，各给药组每日予相应药物灌胃，正常组和模型组每日灌胃等体积蒸馏水，各组均连续灌胃8周。收集处死前1 d各组大鼠24 h尿液，检测24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)；处死前尾静脉取血，测血糖(GLU)；末次给药后5 h，各组大鼠予异氟烷吸入麻醉，腹主动脉取血，分离血清测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)；取双肾，采用苏木素-伊红(HE)染色法、马松(Masson)染色法观察各组大鼠肾脏组织病理变化；分别采用免疫组化(IHC)法、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠肾组织Wnt1、β-catenin、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达。结果：模型组大鼠GLU、Scr、BUN、24 h-UTP水平均明显高于正常组(P＜0.01)，各给药组大鼠上述指标均明显低于模型组(P＜0.01)，芪蛭通络方高剂量组上述指标均明显低于厄贝沙坦组(P＜0.01)，芪蛭通络方对上述指标的改善作用表现出一定的剂量依赖性。病理图片显示，模型组大鼠肾小球结构遭到破坏，炎性改变明显，肾小管扩张，肾间质纤维化明显，肾组织蓝色胶原分泌增多且伴病理损伤；各给药组大鼠肾组织病理改变均有不同程度的改善，以芪蛭通络方高剂量组改善最为显著。免疫组化法及蛋白免疫印迹法结果显示，模型组大鼠Wnt1、β-catenin、CTGF、GSK-3β蛋白表达均明显高于正常组(P＜0.01)；各给药组大鼠上述蛋白表达均明显低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)。免疫组化法结果显示，芪蛭通络方高剂量组上述蛋白表达均明显低于厄贝沙坦组(P＜0.05，P＜0.01)；蛋白免疫印迹法结果显示，芪蛭通络方高剂量组Wnt1、GSK-3β蛋白表达明显低于厄贝沙坦组(P＜0.05，P＜0.01)，β-catenin、CTGF蛋白表达与厄贝沙坦组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。芪蛭通络方对上述蛋白的表达表现出一定的剂量依赖性。结论：芪蛭通络方可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活，在一定程度上延缓肾间质纤维化，从而起到保护肾功能的作用。

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